牛血清蛋白标准曲线.docx

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牛血清蛋白标准曲线

牛血清蛋白标准曲线

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牛血清蛋白

　　表酚法定制牛血清蛋白及测定人体血清蛋白加样操作表

　　01234567样1样2试管编号

　　200ug/mL牛血清蛋白标准液1mol/1000mL人血清蛋白

　　磷酸缓冲液以上各管均加入，振荡均匀后，反应15minFolin酚乙以上各管均加入，振荡均匀后，55℃水浴反应25min

　　A650nm实测OD值

　　表酚法定制牛血清蛋白标准曲线，微机数据处理表

　　0123456试管编号

　　标准牛血清蛋白呈色浓度

　　A650nm实测OD值

　　回归方程对应OD值

　　线性回归方程斜率a

　　线性回归方程截距b

　　线性回归方程

　　实验相关性=+凝血酶原时间标准曲线半定量测定纤维蛋白原含量的方法的临床应用

　　凝血酶原时间标准曲线半定量测定纤维蛋白原含量的方法的临床应用

　　孙彦平1　　杨　光2

　　（11黑龙江省鸡西市矿业集团总医院,黑龙江鸡西158100;

　　21黑龙江省林业总医院,黑龙江150040）

　　〔文章编号〕1002-2376（xx）02-0017-02　　〔中图分类号〕TH773　　〔文献标识码〕B

　　〔摘　要〕目的:

利用Controlplasma建立一种简便、易于临床实验室开展的半定量纤维蛋白原（FiB）检

　　测方法,并对其初步评价。

方法:

用亚硫酸钠手工法检测不同浓度FiBReferenceplasma血浆的FiB含量,用其为参比血浆,用半自动血凝仪测其PT凝固时间及吸光度,建立PT凝固时间（s）参比血浆浓度（%）的曲线1,及FiB含量（g/L）与吸光度（E）的标准曲线2。

利用标准曲线测定待检血浆FiB的含量（g/L）。

结果:

血浆FiB含量与PT（s）及吸光度（E）有很好的相关性（r=01992）。

单种试剂本法测定Controlplasma血浆FiB值,重复性良好（CV

　　现代

　　验检学杂志

　　第医６卷２

　　第４

　　２１期０１年７月

　　ＪＭｏａｄＬＭｂｅＶ．ｏＮｏ６４Ｊｌ０・１ｄ，１，．，２ｕｙ２　

　　１　１１

　　瓶

　　０其，ＣＣ＂　和和流行病研学都究迫切要需同实不验室及同一实　期到抽取时３转移至液中，氮中一２４￣２￣存的样品先在一８５Ｃ储０＂冰箱放Ｃ置夜过再转至　验室不同时的血间测定脂结果准确、可比性，有因　

　　２血此测脂定必须做到标准化。

国家国胆固醇教　育液中氮在１。

个月稳性定试验束结将时述前所　有美混融计划Ｅ

　　ＰＣＤ—　Ｃ。

Ｌ、醇治冠心指病的有效南施实，出包了括胆　总ＨＬＤ—和Ｌ防提用日本第一化学试剂及厂推家荐的分析参数　固三酰甘油ＴＤＨ—和ＬＬＣ　、的ＬＣＤ－

　　１０Ｌ和　分Ｃ析量质标Ⅱ，目达这一目标到首先须建立包　括在立７日７Ａ全自动生化分析仪测定ＨＤ—要ＤＬ］Ｃ，　每　考参法方和标物准质参考的系统，通过准标计　化Ｌ—控制法方批精内密＜度１，瓶取３样ｌ重进行再均匀性、稳性定分析评估并　将参考划统系的准确转移性至常规分析系统或使　肛复测，定３份，匀均性和稳定性对不确定的贡献度。

　常规分析能源至参考溯系统［］２。

年我近建们立　　了准确超速的心离高效相液谱色Ｐ定血ＨＤ—和Ｌ清ＬＣ的方法过详，细的方　ＬＣ—Ｄ

　　经１４ＨＬＣ和ＤＬＬＣ定值和不确定度估评．　Ｄ——一

　　取

　　８

　　＂存Ｒ的，２ＲＭＭ５温室１复ｈ溶后　０Ｃ储１ＭＲ，　

　　法研究学和验证有望成候为选参方考法［，按国　并４］

　　标家准质技物术规范ＪＧ１０—

　　９及４关技术　

　　缓缓有匀摇，用美国ＣＧ胆醇固参考方法实室网验Ｄ络　Ｒ定Ｍ比对法方法测８定　ＬＣＤＧＬ指　

　　ＣＬ６批，３批每品样沉１管、淀前每测定管３　文件　研制适于用常规析分统校系准的近、　ＨＤ—　病后每共接７血人清样品基质的新鲜冰冻人血清ＨＤＬＣ和　次，３每批品样淀沉２管、测管定３次，２　Ｌ－—ＬＤ标准Ｃ质物，总如下结。

现　

　　１材料与方法　

　　个数据。

ＤＬＣ用ＵＣＰＨＣ法测　３定批，Ｌ—／Ｌ批　每每样品心离２管、管测定２次，１每共２个据数。

　　每１１血清制备择选身健康、体龄～２５　．年ＯＯ岁、　男女各半、Ｖ和ＨＨＢ阴Ｃ的性志者，愿　Ｈ取ＩＶＶ，

　　采批样

　　前品处理和仪分析过器都程独立在工的作　日完成

　　。

ＬＣ和ＬＬＣ定值方法的有效经性美　与Ｄ—ＤＨ—国ＣＣ参考方法对比验证。

Ｄ　根据ＧＢＴ１００３２０［和ＩＯ导则３Ｌ／５，０．—０。

８Ｓ　５７　］准标物质不的定确度主包要括测定结重复果性除菌过滤和１２ｌ支ｍ装封盖分Ｍ。

１Ｒ．　Ｒ／，２ＭＲＭ５物质纯的不确度定度、　，匀性均稳和定性对总不确定　

　　分

　　装分别为量８６支、０３支０、８３０支，于一８＂存０Ｃ　冰度的献等贡　。

　　箱。

　　１２仪器和试　剂．

　　１５多实验室测

　　定果结　

　　．２

　　份当日采取的新鲜人　

　　血清

　　与千冰包装的Ｒ１Ｒ２Ｒ５Ｍ在２ｈ内　送Ｍ，，Ｍ　

　　１２

　　１主要仪器：

Ｏ一超离速心机ＨＰ１高效液０相色谱仪高速离心机国　ａｋｒ，Ｈ，ｅｒｓ德，

　　达京１６北家三级甲等医的院临床实验室，别　分用

　　不同分析系统定测ＨＤＬＣ和

　　ＬＬＣ各３次—。

Ｄ—

　　１

　　统６学计分析　数据分析件软为ＥＣＬ．　ＸＥ　

　　７７全Ａ自动生化分析仪Ｍｉｒ２—０。

单用因方差素分析检均验性。

同匀储存　１０ｉＨｈ，ａ，ｃ　ｏ０７不采ｂＬ５０稀释器光光度计、ａ０　ａｌｎ，Ｈｔ，深　温度定测的ＨＤＬ和ＣＬＣ与时间Ｌ进行稳定性　——Ｄ

　　温低冰箱ｈＴｒ，１２。

２主要试剂：

．．　ＨＤＬＣ和ＬＣ匀Ｌ相法试　剂—Ｄ—胆固测醇标定准溶液用我国国，

　　回归　分析及趋性势验，检斜ｂ率进行ｔ对检验。

　　２结　果　２均１匀性和稳定检验性．　ＭＲ１Ｒ２，Ｍ５　的，ＲＭ

　　家

　　一级标准质ＧＢ物２３Ｗ０　９０ａ配制，谱色纯乙、腈

　　异　丙醇和正己分子量　ｓＦｒＳｉｔ，ｉｈｆｅ，　０５００硫０酸葡聚糖。

１３

　　均匀性和稳定性检验．　Ｒ１Ｒ２Ｒ５的　ＭＭ，Ｍ

　　，

　　ＨＤＬ和Ｃ—均Ｌ匀测性定原始据数符合正　态—ＤＬ分布Ｃ，果结方分析差显性著平水Ｐ值分为别１Ｏ，．　０

　　０５，．和２０９，８．１，ｏ＞Ｐ００，异　．０９０．９０９，．０均．５差

　　统无计学意义，明均性匀良好说　血。

清一８在和℃一２℃储存年１，２℃及　Ｏ月０４２

　　时℃１月，ＨＤ—５对Ｌ和ＣＬＬＣ定测果结与各　时Ｄ—

　　基

　　质为血清，属均性良匀好的液体按一。

标级物　质准技术规范规定【随机抽取Ｒ１ＲＭ２Ｒ　Ｍｓ，，Ｍ５　各

　　１５支

　　定Ｈ测Ｄ—ＬＣ和ＬＬＣ按。

ＩＯ则导３Ｌ设　间点归回析的斜分率进行ｔ，验分别为值７，１Ｄ—Ｓ５７检］ｔ７　．３

　　２，．５２１１．１．５４９，６５，临　稳定计试性验１份，与ＭＲ１Ｒ２Ｒ备工　５１．Ｏ９５，７和．１，８９３．，１１．ｔ４用Ｍ，，制Ｍ

　　艺相

　　同的清血，液氮￡　　．４仅０）＜

　　０时　间点，一℃和８一２℃储存３１６在０，０，月２，℃４

　　００，．差异５无计统学义意。

表明在一

　　８０Ｃ储￣时存，血　

　　储存０１５月２，５．，２，储存℃０２，．，．５０１月５，别分　清在ＤＬＣ和ＬＨＬ可Ｃ稳定至少１年。

—Ｄ—

　　１２　

　　代现检验学杂医

　　第２击卷６

　　第

　　期

　　４２１

　　０１年７月

　　ＪｏａＭＬｄｂＭｅＶ．６０Ｎｏ４Ｊｌ．０１，ｄ２１，．ｕ，ｙ２　

　　１２

　　２ＤＨ—和ＬＬＣ定值的和不定确度评　估．　ＣＬＤ

　　化性—质存在定一重叠，定和准义确定测蛋脂胆白　固

　　２２１定值法方有的效性验证：

实验为室国际　醇非困常难。

美国ＣＰＮ推荐的际影响较国大　的．．本Ｅ

　　第上一参个考法方实验室网络ＣＲＭ成Ｌ，　员Ｎ自

　　ＨＤ

　　ＬＣ和Ｌ——ＬＣＤ参考法是方Ｃ的Ｃｃ／Ｄｕ化学　沉

　　２０４０年至今每两月次一用ＤＭ法参加ＭＣＮＣＲＬ　淀法，［此１法最的大问是题样品量大备制　引５ｍ１，费时、技术要求高。

实本　成员验实室的问ＨＬＤＣ比，对析ＣＣ提供多　品样需多步手工量操容作—，分ＤＨＰＣ准确测定血Ｌ清—的　ＤＬＣ种冻血清的结冰果与参考方法的偏在差０士０９验５室建立了ＣＵ／Ｌ．２　ｅｏ　Ｌ１。

　ＬＬＣ值定方法与美　方法ＤＬＣ，定测总Ｃ为０６～１１　　，Ｄ——ＬＶ．．２５测　

　　定Ｄ因此‘用　国］ＣＣ的考方法参定　量对比相关法好良［。

表结果　与ＣＣ参考的方　法定量法相［，当Ｄ４］ＭＭ，ＭＲ２Ｍ５的Ｌ—ＬＤ　明ＨＤ—和ＬＬＣ值定方法可靠，溯源　到这一方法和ＤＣ法为Ｒ１Ｒ，ＬＤ—Ｃ可Ｃ

　　的Ｃ考参方法。

Ｄ　２２２定值：

．．Ｒ　１ＭＲ，ＭＲ２５的ＨＬＤＣ　和，Ｍ—Ｌ—测定均值分为别１０６６１２１１４和　ＤＬ．４Ｃ，．５，８．４５７２４２１７８ｍｍ／ｏ数据经检验离无群　．７，．９，．８　ｌＬ值，、合正态分布。

符　２２３不确定度评估：

要不确度定分量及扩　展．．

　　不主确度见表１定　。

表

　　１Ｒ，ＭＲ的２Ｈ．Ｄ　Ｍ１Ｒ，Ｍ５ＬＣ和ＬＬＣ不确定评度Ｄ估－

　　Ｃ和

　　ＨＬＤＣ值定。

—　

　　表　２６１家临床实验室定测３血　种清ＤＨ—Ｌ和ＬＣ果及与定结值比较　

　　ＬＣＤ—

　　纯度标准物质与病样人基质品不同，常不适　通

　　宜在常规方法使用中，因此血人清质基的标准物质　可在常分规析统系质的量评价和准确性证验中发　挥

　　更重要的用作。

清血标物准最好质证能在不同　明分系析统有互通性中，样才可用于常分规析系统　２２这４定值果：

值结达表方式为均±值扩展　不．．定确定度，展因子为２扩ｋ３。

种血清的ＨＤ—ＬＣ和Ｌ　ＣＬ值定分别为６１０．２．，±０５０　７Ｄ．—４士０８１０６２．２，１

　　４１００２ｍｍｏ／和４５７±００７．，±　．８９土．２　｜Ｌ７．．９２４

　　校２准溯或。

影响源互通性的要主原因包括质基效

　　应，

　　添加剂如质分成的组成　

　　、和浓度不同干、等起引基的质变化体、黏度不　冻液同造成的等影响。

等常认新为或鲜冰冻血清存不　通

　　在基效质应　１６家实室验测定果结证明用，外　采无

　　０

　　０２１７８００１ｍｍｏ／　．７．８，±．　４ｌＬ。

　　２３

　　多实验室不同分析统系测定Ｒ．　１ＭＲＭ　２，，

　　源添

　　加物、一８℃保存、冰运输时，１Ｍ在　０Ｒ，

　　Ｒ干Ｍ２Ｒ，５与新鲜Ｍ血清的ＤＨＬＣ和ＬＬＣ在常　Ｄ——规方法中行为近相未见，显基明效质应。

　　Ｒ

　　Ｍ５的结　果１６临家床实验室别用分不同分析系统测　定ＲＭＲ１ＲＭ５的２Ｄ—Ｈ，ＭＬ，Ｃ和ＬＬＣＤ—结果　表见２与本室定值偏差满的美足国ＮＣ对Ｐ　Ｅ，ＨＤ—Ｌ和ＣＬ常规方法差分别偏小５于　和ＣＤＬ—　４的质量要求。

外常规用方法定ＲＭ测１　此Ｒ，２　Ｍ，Ｍ５和Ｒ份新鲜人２清血ＨＤＬ—Ｃ和ＬＬＣ的结　Ｄ果—大平致行、化趋势一致明制，备的冰冻人清　血变表在常分析规系统中互通性好。

　３良讨　临论实床验室常规定Ｈ测ＬＤＣ和ＬＬＣＤ——

　　多用匀相法，同原理方的法、同实验室问结　果不不

　　实本室以往验成功曾研究血清Ｔ和ＴＧ　Ｃ标

　　准物口对质血清准标物质的备制及均匀性、定　　，稳性评价一有定经验。

血清脂中白蛋问的质脂处　于

　　但

　　不断交换中，ＨＤＣＬ和ＬＬＣ较—ＴＤ—等Ｃ其指标他

　　对　温更度敏感同温度储存。

的定稳

　　性实验结果也　不明证，在一８℃保存ＨＬＤＣ和Ｌ—至可　少只０—ＤＬＣ

　　定稳年。

这１温一度的更长储存时间仍在研究。

中　３种

　　冰冻血清人Ｒ，Ｍ１ＲＭ２ＭＲ已５２１　于，００

　　不

　　一致是待亟决解的重要题问　［。

通过建立和　年国家由质量监督检验检疫总局批准为ＨＤ—　１］ｈＬＣ完善考系参统，证定测果结的源性溯是现实实验和　ＬＬＣ国家一级标准物质　９７，８Ｗ１０。

０

　　ＬＬＣ尚无公认参的考方法和纯度准物标质，Ｄ—主　

　　由于要血清不同脂蛋白间之有没确明界的限理，其

　　参

　　考献文：

　　［］ＥｐｒＰｎｎｌＤｔｉ　ｃｖｌａｎａｉｄＴａｍｅｒ　１ｘ　ｔｅａｅｏ　ｅｔｅｎａｕｔＥｎ　　ｅｔ—　　ｏｏ

　　代现验医检杂学志

　　第

　　２６卷

　　４第期

　　２

　　１１０年７

　　月

　　ＪＭｏａＬｄｂＭｅ，１２，ｏ４Ｊ．ｌ０１Ｖｏｄ．Ｎ６．，ｕ２ｙ１　

　　１３　

　　ｎ　ＨｆｉｈＢｏｌ　ｏｔｒｌｅｉ　ｔｏ　ｇ　ｏＣｄｈｌｅｏｓ　Ａｎｌｄｓｕｔ．Ｅｃｔｘｖ　ｅｕｉｅｓｍａｙｍ　ｈｏｈ　　ｒｅｏｔｏｈ　ｔ　ｎｌｈＣｌｓ　ｕｒ　ｆｅｔｔｉｄｒｐ　ｒｔｆｅＮａｉａ　ｅｏｏ—

　　北京：

　　国标准中版出社，０８２．０

　　ａＮｎｉｌｔｎａｄｏ　ｈ　ｏｌ　’ｂｐ　ｉＣｈｆｎ．ｔａ　ａｄｒｆ　ｔＰｅｅｐｓｅＲｅｕｌｏ　ａ　ｉｏＳｃＤｃｉｉｅ　ｏｈ　　ｒ　ｆｒｆｎｅｒｍａｅｉｌ３）　ｒｔｓｖｆｒｔｅｏｗｋｏ　ｅｅｃｅｔ　ｒｓａＪ．ＡＭＡ，０１２５１）８２－４７ａｅＩ［ＩＪ］　２０，８１３１１８６３：

５　—５

　　［．ｏ红李霞，１３国邦汉，满，永美国ＣＣ胆固醇参　等考．Ｄ方法和高度密脂蛋白胆固醇指定比对方法的运　和行应用［中华检验］医学志杂０，９　．Ｊ０２２，５０－

　　：

．５８　

　　０］［王３

　　抒，文祥．脂和蛋脂及白载脂蛋白检测的标　陈血

　　准化

　　Ｄ］华中检验医杂学志０，６２５４６５．２０，６：

９—７７．　

　　ＷａｇＳｂｎ，ＷＸ．ｔａｎｚｄｏｔｆｌ　ｉｌｒｏ—ｎ　Ｃ　Ｓｅａｄｒａｉｉｎ　ｏｉｄ，ｉｏｐ　ｐｐ

　　ＬＨＸｉ，ｏＨＢ，ａ　，ｔａｏ．ｔｒｌｅｆｒｒｎｅＧｕ　ＭｎＹｅ　１Ｃｈｌｓｅｏ　ｅｅｅｃ　

　　ｍｅｈｄａＨＤｄＬ　ｈｌｓｅ　ｏｅｉｔｎｄｃｍｐｓｎｒｔｏ　ｎ　ｏｃｅｔｒｓｌｇａｅｏ　ａｉｏ　ｄ

　　ｔｉ

　　ａｄｏｉａｐｏｅ　ａｕｅｎ］［Ｃｉ　　ａ　ｅ　ｎ　ｐｌｏｒｔｉｅｍｓｍｒｅｔ．ＪｎｈＬＪｂｎｐ

　　ｎＭｅ２０，９６：

７—７．ｄ，０６５４５６

　　ｍｅ　ｈｄａ　ｅｆｒｄｉ　ｈ　ＣＳＣＤＣｈｌｓｏ　ｔｏｅ　ｐｒｓｏｍｅｎ　ｔｅＵ　ｏ　ｔｅｒｌ

　　Ｒｅｅｅｃ　ｏｔ　ａｏａｏｙＮｅｗｏｋＪｈｎＪｆ．ｒｎＭｅｈｅＬｄｂｔｒｒ　ｔｒ［］Ｃｉ　

　　Ｌ　ｅａ２０，５２０—：

０．ｂＭｄ，０９３　　４５５　

　　８

　　［３Ｄｎ　，ｏＨＢｎＹ　ｅ　１Ｓｍｒｌｗｅ－ｓｔ　　ｏｇ４Ｊｕ　Ｇ，ａｇ，Ｒａｔ．ｅｕｏ　ｎｄｉｙ

　　ｐｌｐｏｅａｄｎｈｇｅ－ｓｔ　ｉｒｏｔｉ　ｌｓｅｈｏ　ｉｏｒｔｉ　ｎ　ｉｈｄｎｙｌｉｐｏｅｎｃｅｏｔｒｌｐｄｔｒｎｄｂ　ｌｒｃｎｒｆｇｎｔｎ　ｈ

　　ｇ－ｅｆ　ｒｅｅｍｉｅｙｕ　ｔａｅｔｉａ　ｉｄａｉｈｐｒｏ—ｕｏ

　　［１赵海，舰１］汉邦国，张传宝，高密度脂蛋白胆固醇测　等

　　定匀相法试．剂价评］［中检验医华学杂志，０９３Ｊ．　２０，２

　　１５５　５５：

２—２．

　　ｍａ

　　ｃｑｉｃｒｍａｏｒｐｙ．Ｊ　ｉｉＲｓ２１，ｎｅｌｕｄｈｏｔｇａｈ［Ｊ］ｐｄｅＬ０，１　ｉ　　５

　　３３３２８２：

８８—．　

　　Ｚａ　，ｏＨＢ，ａｇＣＢ，ｔａ．ａｕｎｏ　ｈｔｏＪＨＧ　ｕＺｈｎ　ｅ　１Ｅｖｌａ　ｆｉｏ

　　ｔＰｒｏｅｍｃ　ａｆＨ７ｏｇｎｏＤｉｓｔｅａｅ　ｔｈ　ｅｒｆｎｅｏ　　ｍｅｏｅｕ　ｒｃ　ｅＲｇｎｓ

　　Ｉ］华中人民共和国国计家量术技范规质　ＪＧ１０—９４Ｍ］北京：

国计量出版社，９５１Ｊ　０　６１［．中９１９：

一

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　　．ｆ

　　ｒＬＣｏｅｔｌＪ．ｒｎｈＬＪｂｅＭ，０９３　ｏ　ＨＤ—ｈｌｓｏｅ［］Ｃｉ　ａ　２ｄ０，２　

　　）６　７７１：

　　ｆ．ｒｒｒ　ｅｅｅｃ　ｔｒｌ．Ｊ　０６９１．［ｏ　ｉｒｆｒｎｙｐｍｅｍａｅｉｓａＧ１Ｊ—９４Ｍ０］ａ

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ｉａｅｒＭｌ　ｇｂｈｉｎ　ｕｅ９，：

５—ｎＣｉｈ　ｎｔｏｏｙＰｕｌｓｉｇＨｏｓ１９　１ｉ１．

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　　Ｇ　ｏＨＢ，ｕ　ＬｊＨ，ＸｈｏＨＪ　ｅ１Ｅｖｌａｎｏｉ　ｈ　Ｚａ　，ｔａ．ｕａｔ　ｏｔｆｅＰ

　　ｆｅｍｅａｏ　　ｏｏｇｅｎｓｕｉｅｔＤｅＲｇｎｔ　ｏ　ｒｏｎｒｃ　ｆ７Ｈｍｅｏ　ｒｃ　ａｅｓｆ

　　［］ｒ全６　

　　浩，志永．准物及质其应用技术［］２版．韩Ｍ标．　

　　Ｈ—Ｄｌｈｓｅ［ｏ３Ｃ　　ｉｌ　ａ　ｃ，０９２　ＬＣｏｅｒｔｌ．Ｊ

　　ｈｎＪｉＬＣｂｉ２０Ｓ，ｎ

　　７）８】．ａｉｌ，８９１：

一５　

　　ｏ［３ｔＩｒａｉｎａ　ｇａｉｔａｎｆｏｒＳｎｄａｄｔＲｅｅｃｅ　—　ｎ７ｎｅｔｏＯｒｌｎｚｉ　　ａｏｒ　ｆｒｎｅｍ　

　　ａｒｔｓＧｅａ　ｒｄａｔｔｓｉｌｉａｃｅ　ｏｒｐｃｒｉｉｅｉｌ—ｅｎａｌ　ｓｎａｉｃｔ　ｒｎｐｉｌｆｓ　ｅｔｆ　

　　—［　董４１］

　　ｃｔ

　　ｎ．ＳＳ　ｉ３ｅ０，６ａ［ｉ］ＩＯＧｕ　５２０．ｏｄ　

　　，军红霞，李满永，．清总胆醇固甘油、、血总　等游甘油离和油甘三酯标准物的研制质口］中检华　验．

　　医学杂志，０８３２６２９２０，１３７：