公共卫生微生物采样检测方法总结.docx
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公共卫生微生物采样检测方法总结
公共卫生微生物采样检测方法总结
1、空气中微生物的检测方法------细菌总数
(营养琼脂,121℃高压灭菌20min,培养时间37℃,48h)
1.两种方法
(1)撞击法(二级或者六级微生物采样器)
(2)自然沉降法(暴露5min)
采样:
梅花布点,高度:
1.2~1.5m;离墙:
1m。
2、茶具微生物检验方法
(一)细菌总数
1、生理盐水的制法:
将氯化钠(8.5g)溶解于蒸馏水(1000mL)中,分装到试管内,每管10mL,121℃高压灭菌20min。
2、采样:
棉拭子湿润生理盐水,在茶具内、外缘涂抹50cm2,即口唇接触处一圈(1~1.5cm),用灭菌剪刀剪去棉签手接触处,将棉拭子放入10mL生理盐水中,4h内送检。
3、检验程序:
检样→各1mL加入两块灭菌平皿(若污染严重,可十倍递增稀释)→37℃,48h培养→菌落计数→报告
4、单位:
cfu/cm2。
(2)大肠菌群
2、培养基:
乳糖胆盐发酵培养液(双料的,每管10mL,115℃高压灭菌15min)
3、检测方法:
发酵法(具体内容课本11页)
4、检样(测定细菌总数余下的样品)
5、革兰氏染色过程:
(阳性菌显紫色,阴性菌显红色)
(1)初染:
1min,水洗;
(2)碘染:
1min,水洗;
(3)脱色:
30s,水洗;
(4)复染:
1min,水洗,待干,镜检。
5、结果报告:
凡乳糖发酵管最终产酸产气,革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌,即可报告检出大肠菌群。
三、毛巾、床上卧具微生物检测方法
(一)细菌总数
1.采样
(1)毛巾、枕巾:
对折后两面的中央各25cm2;
(2)床单、被单:
在上下两部中央25cm2来回涂抹;
2、检测程序同茶具细菌总数检测
3.计算单位:
cfu/25cm2。
(二)大肠菌群(检测程序同茶具大肠菌群检测)
1.涂抹法:
(用测定细菌总数时采集的样品)
四、理发用具微生物检验方法
(一)大肠菌群
1、采样
推子:
在推子前部上下部分均匀各涂抹三次;
理发刀、剪和修脚工具:
在使用的刀、剪面的两侧各涂抹一次采样;两个刀或者两个剪为一份样品。
2、检样5mL倒入双料乳糖胆盐发酵管,37℃,24h培养;
3、分离培养:
接种伊红美蓝平板,做革兰氏染色镜检;
4、证实试验:
接种乳糖发酵管37℃,24h培养,观察产气情况。
5、结果报告:
乳糖管最终产酸产气、革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌,可报告为大肠菌群阳性。
(2)金黄色葡萄球菌
(3)培养基:
7.5%的氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤培养基
(4)步骤:
(1)做大肠菌群剩余的5mL倒入培养基中,37℃,24h培养;
(2)接种血平板,37℃,24h培养;观察形状:
圆形、金黄色、凸起、表面光滑、周围有溶血圈;
(3)挑菌落做镜检:
革兰氏阳性(红色),葡萄状排列;
(4)甘露醇发酵试验:
接种到甘露醇发酵培养基中,37℃,24h培养,观察是否产酸;
(5)血浆凝固酶试验
玻片法:
在干净的玻片两边,一端滴一滴生理盐水,一端滴一滴血浆,接种环挑菌落分别与它们混合。
5min后均无凝固现象的为阴性;若血浆中出现颗粒状凝块而生理盐水中没有,则为阳性。
5、拖鞋微生物检验方法
霉菌与酵母菌
(生理盐水中要加入玻璃珠)
2.培养基:
霉菌培养基、(虎红)孟加拉红培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)
3.取样:
有棉拭子在每只拖鞋鞋面与脚趾接触处的5cm×5cm面积上均匀涂抹3次,一双拖鞋为一份样品;
4.将盛有棉拭子的试管在手心用力振荡100次,使霉菌孢子分开;
5.培养:
在霉菌培养箱中25~28℃,培养观察一周。
6.单位是cfu/50cm2。
6、浴盆、脸(脚)盆微生物检测
(3)细菌总数
无菌生理盐水:
分装125mL/瓶供浴盆采样;50mL供脸(脚)盆采样。
采样部位:
在盆内侧二分之一到三分之一高度;
布点:
浴盆梅花布点;脸(脚)盆相对两侧壁布点;
方法:
涂抹法(与茶具方法一致)
单位:
cfu/25cm2。
(4)大肠菌群(同茶具)
七、游泳池水微生物检测
(1)、细菌总数
1.采样瓶:
无酸、无碱、无毒的玻璃容器。
2.灭菌前要加入足量的10%的硫代硫酸钠溶液,一般125mL水样加0.1mL。
3.采样
游泳池水
面积,㎡
儿童池
成人池
天然游泳池
≦1000
>1000
≦2500
>2500
采样点数
1~2
2
3
5
>5
注:
在水面下30cm处取水样450mL
4.操作步骤(与茶具细菌总数一样)
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