Agilent1260液相色谱仪验证方案解析.docx
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Agilent1260液相色谱仪验证方案解析
Agilent1260液相色谱仪
验
证
方
案
方案编号:
方案制定
万案起早
签名
日期
质检部
方案审核
方案审核
签名
日期
生产部
质管部
工程部
物流部
研发部
方案批准
签名
日期
验证小组人员名单
组长
姓名
职务/职称
部门
成员
姓名
职务/职称
部门
1液相色谱仪概述
2验证目的
3验证范围
4验证参考文件
5计划及进度
6设计确认
7安装确认
8运行确认
9性能确认
10验证周期
1液相色谱仪概述
液相色谱仪是常茂生物化学工程股份有限公司用于检测成品,原料,中间品的检测设备。
设备由输液泵,自动进样器,柱温箱,紫外检测器,色谱工作站组成。
由高压输液泵将规定的流动相泵入色谱柱,自动进样器注入供试品,由流动相带入色谱柱内,各组分在柱内被分离,并依次进入检测器,由色谱工作站软件记录和处理色谱信号。
2验证目的
确认Agilent1260液相色谱仪能符合GM标准及设计要求,所制定的标准及文件符合GMPg求,确保液相色谱检查法的准确性。
3验证范围
本验证方案适用于常茂生物化学工程股份有限公司的Agilent1260液相色谱仪,该
设备安装于质量部质量控制室的仪器室内。
验证内容包括对Agilent1260液相色谱仪进行设计确认、安装确认、运行确认、性能确认。
4验证参考文件
本方案以国家药品监督管理局颁布的《药品生产质量管理规范》、由国家食品药品监督管理局组织编写的《药品生产验证指南》、中国药典2010年版为依据,制定了高效液相色谱仪的验证方案。
5计划及进度
整个验证活动分四个阶段完成:
设计确认:
从
年
月
日
至
年
月
日;
安装确认:
从
年
月
日
至
年
月
日;
运行确认:
从
年
月
日
至
年
月
日;
性能确认:
从
年
月
日
至
年
月
日。
6设计确认
6.1供应商的资格和服务
6.1.1设备供应商应有良好的生产运营情况,没有与国家法规或地方法规相违背的生产状况。
6.1.2安装时能提供现场指导或培训的技术人员数量、资格,并且将来在日常使
用中能提供维修。
6.2设备
6.2.1设备情况
621.1设备部件完好,无破损;
621.2内外表面光滑、平整、容易清洁;
6.2.1.3易拆卸、易维护。
6.2.2设备特征:
液相色谱仪由输液泵,自动进样器,柱温箱,紫外检测器,色谱工作站组成。
6.3可接受标准,如表1。
表1可接受标准
测试项目
认可质量标准
紫外检测器
基线漂移:
v0.005AU/60min基线噪音:
v0.0001AU
波长准确度:
w±2nm
输液泵
流量设疋值(ml/min)
0.5
1.0
2.0
泵流量设定值误差(%
±2%
±2%
±2%
流速稳定性误差(%
2%
2%
2%
梯度准确度(%
<±1%
自动进样器
前后进样带入量
<0.1%
柱温箱
柱温箱设定值误差「C)
<±2C
柱温箱稳定性「C)
<1C
重现性测试
定性测量重现性(RSD
<1.0%
定量测量重现性(RSD
<1.0%
线性测试
RS0.999
7安装确认
7.1概述
Agilent1260液相色谱仪由安捷伦仪器有限公司提供,安装于质量部质量控制室的仪器室,用于成品,原料,中间样品的含量和有关物质检测。
安装确认目的:
证实所供应的设备规格符合要求,设备所应备有的技术资料齐全。
开箱验收应合格,并确认安装条件(或场所)及整个安装过程符合设计要求。
7.2安装确认内容
7.2.1基本资料检查:
检查是否有各种必需的书面资料,如表2。
表2资料检查
确认项目
有
无
存放地点
备注
采购定单
使用说明书
设备的合格证书
装箱单
保修卡
安装平面图及安装图
使用维护保养标准操作规程
7.2.2设备所需外部环境确认
目的:
确认设备的安装是否符合原设计的条件,如表3
表3外部环境确认
确认项目
合格要求
验证结果
备注
温度
5-40C
相对湿度
<85%
地面
平滑、不易起尘
环境
无腐蚀性气体
7.2.3设备型号确认
目的:
确认设备各部件的型号,保证其与订单和装箱单所描述的一致,如表4
表4设备型号确认
部件
设备型号
序列号
验证结果
输液泵
自动进样器
柱温箱
紫外检测器
724公用设施确认
目的:
确认公用设施,使其满足设计要求,如表5
表5公用设施确认
项目
设计要求
验证结果
备注
电压
220V
电源适配
三孔插座
725软件版本确认
目的:
确认安装的软件与系统备份和维护的软件版本是相同的,安装的软件符合系
统和应用要求。
操作系统
当前的操作系统与系统备份和维护的操作系统版本相同。
源版本:
备份版本:
软件版本
当前应用软件与系统备份和维护的软件版本相同。
源版本:
备份版本:
7.2.6硬件环境与安装确认
目的:
根据生产商硬件和系统设计规格标准,确认仪器和控制器工作区域符合要求,如表6。
表6硬件环境与安装确认
序号
描述
验证结果
1
仪器放在水平的工作台上,计算机在仪器旁边。
2
检测器,输液泵,自动进样器,柱温箱,计算机、打印机和电源之间止确连接。
3
温度在5-35C,湿度在45-85%之间。
4
室内无强电磁干扰源及有害有毒气体。
5
排风口和进风口对仪器和计算机无污染。
6
打开检测器,有信号出现。
7.2.7软件配置确认
目的:
确认安装的应用软件符合计算机系统和外围设备的要求,如表7
表7软件配置确认
序号
描述
验证结果
1
打开电源开关,启动WINDOWSXP
2
打开液相色谱仪各部件电源开关,在桌面上双击
Instrument1Online图标。
3
确认AgilentChemStation软件,仪器跟软件连接。
4
进入AgilentChemStation主画面。
7.2.8部件清单
目的:
确认仪器日常维护和操作所需要的消耗品和备用品,如表8
表8部件清单
部件名称
数量
存放地点
备注
7.2.9维修服务确认
目的:
确认仪器出现故障后能及时的处理,不影响操作。
每本操作手册上都有简单的维护方法,经过仪器培训的操作人员可以根据说明书进
行简单的维修和零部件的更换。
如果有其它比较大的问题,用户不能解决的,可以电话通知厂家的维修工程师。
维修电话:
7.3安装确认结果说明
说明此确认过程中是否依草案计划进行。
如有偏差或变更应根据“偏差管理规程”对此给予说明并对是否通过或需补充的内容加以说明。
8运行确认
8.1目的:
证明液相色谱仪的软硬件功能运行正常,并且达到设计要求及检测要求。
8.2运行确认的内容
821噪音和漂移的确认
8.2.1.1方法:
检查条件:
选用C18柱,以100和醇为流动相,流速为1.0ml/min,
紫外检测器的波长选在254nm开机预热,待仪器稳定后记录基线60min,测得1min内基线波动幅度作为基线噪音,用检测器自身的物理量(Au)作单位表示,基线漂移用60min内基线偏离原点的值(Au/60min)作单位表示。
检查方法:
监视界面,根据PC计算机、
记录仪60分钟图谱计算结果。
8.2.1.2可接受标准
基线漂移:
v0.005AU/60min
基线噪音:
v0.0001AU
8.2.1.3测试记录
项目
认可质量标准
附件号
实测结果
基线漂移
<0.005AU/60min
基线噪声
<0.0001AU
8.2.2波长准确性的确认
8.2.2.1方法:
波长准确度用波长示值误差表示。
波长示值误差是设定检测器的
波长与实际波长之间的差值。
开启检测器,预热。
配置一份100ug/mL的咖啡因溶液,
当咖啡因溶液从柱子洗脱并流入紫外可见检测器时,停止流速,用190nm到400nm的波
长对咖啡因溶液进行波长扫描,并输出各波长所对应的吸光度,以波长为X轴,吸光度
为丫轴建立一条二次曲线,二次曲线的拐点对应的X轴即为波长测得值。
所测得的波长
与咖啡因的特定吸收波长(205nm,245nm,273nr)i的差值即为波长示值误差。
8.2.2.2可接受标准
波长准确度:
w±2nm
8.2.2.3测试记录
波长(nm)
吸光度(mAU)
二次曲线方程(Y=ax2+bx+c)
波长真实值(nm)
205
波长测得值(nm)
示值误差(nm)
附件号
波长(nm)
吸光度(mAU)
二次曲线方程(Y=ax2+bx+c)
波长真实值(nm)
245
波长测得值(nm)
示值误差(nm)
附件号
波长(nm)
吸光度(mAU)
二次曲线方程(Y=ax2+bx+c)
波长真实值(nm)
273
波长测得值(nm)
示值误差(nm)
附件号
823流速的确认
823.1方法:
以水为流动相,将流速分别设定在0.5ml/min、1.0ml/min、2.0ml/min、
823.2
待流速稳定后,用一校正过的10ml容量瓶接收流动相并开始计时,当流动相接收至容量瓶刻度时停止计时并计算流速。
每种流速做三次,按以下公式计算流速的设定值误差,流速的稳定性误差。
823.3可接受标准
设定值误差:
土2%稳定性误差:
2%
823.4测试记录
设定流速ml/min
第1次收集时间
(mirj)
第2次收集时间
(mirj)
第3次收集时间
(mir)
0.5
1.0
2.0
设定流速
ml/min
第1次
ml/min
第2次
ml/min
第3次
ml/min
平均流速
ml/min
设疋值误差
%
稳定性误差%
0.5
1.0
2.0
824梯度比例的确认
8.2.4.1方法:
使用一根阻尼管(2000x0.12mm代替柱子,检测器波长调至265nm
流速1.0ml/min,流动相A:
水,流动相B:
0.5%丙酮,运行以下的梯度程序
Time(min)
僦动相A
(water)
%流动相B
(0.5%丙酮)
0.0
100
0
0.1
90
10
10.0
90
10
10.1
50
50
20.0
50
50
20.1
10
90
30.0
10
90
30.1
0
100
40.0
0
100
40.1
100
0
50.0
100
0
打开泵,待流速稳定后,让泵开始执行梯度程序。
程序完成后,按下式计算:
H
VX二Hx,Vx:
单元B的梯度;Hx:
每步梯度的响应值
H100
8.242可接受标准不超过土1%
8.243测试记录
H
Hoo
G
D
10%
50%
90%
附件号:
8.2.5前后进样带入量的确认
8.2.5.1方法:
选用4.6mm<250mn!
i勺C18或C8柱,流动相:
甲醇:
水=75:
25,
检测器254nm流速1.0ml/min,进样量5ul,使用下列商业标准品进样。
标准溶液(a):
咖啡因溶液100ug/ml
标准溶液(b):
咖啡因溶液1ug/ml
空白溶液:
水
备注:
标准溶液的分析证书必须作为附件以证明标准溶液是适用的。
进以下序列样:
——咖啡因溶液100ug/ml,1针
水,1针
咖啡因溶液1ug/ml,1针
记录色谱并对咖啡因峰进行积分。
8.2.5.2可接受标准
空白溶液中相应的峰面积百分比不超过标准溶液(a)中咖啡因峰面积的0.1%;标准
溶液(b)中咖啡因的峰面积是标准溶液(a)中咖啡因峰面积的0.9%-1.1%。
8.2.5.3测试记录
咖啡因峰面积(mAu*S)
附件号
标准溶液(a)
空白溶液
标准溶液(b)
8.2.6柱温的确认
8.2.6.1方法:
设定柱温箱的温度分别为30C,40E,将已校正过的温度巡检仪
探头放在柱温箱内,待仪器稳定2小时后,每隔0.5h观察温度巡检仪读数,连续观察
三次。
温度探头在柱温箱内分布见图1
图1温度探头在柱温箱内的分布
826.2可接受标准
柱温箱设定值误差「C):
不超过土2C
柱温箱稳定性「C):
不超过1C
8.2.6.3测试记录
仪器名称
检定部门
检定周期
检定时间
设定温度(C)
30
40
测定次数
1
2
3
柱温箱温度平均值(C)
柱温箱温度稳定性(C)
柱温箱设定值误差(C)
8.3运行确认结果说明
说明此确认过程中是否依草案计划进行。
如有偏差或变更应根据“偏差管理规程”
对此给予说明并对是否通过或需补充的内容加以说明
9性能确认
9.1目的:
仪器的运行确认完成以后,在其功能试验符合要求的情况下,应用标准品或对照品、或检测的样品进行性能确认,以确认仪器符合使用要求。
9.2性能确认的内容
921重现性
9.2.1.1方法:
选用一根C8或C18柱,4.6mm<250mm,5m流动相:
甲醇:
水=75:
25;流速:
1.0ml/min;进样量:
5ul;检测波长:
254nm。
开启检测器电源,将工作波长设置为254nm预热,开启泵的电源开关,流量设置为1.0ml/min(75%甲醇做流动相),等待色谱柱充分平衡且检测器基线稳定,噪声和基线应符合规定的要求,进咖啡因标准品溶液100ug/ml10ul,进样六次。
9.2.1.2可接受标准
定性测量重现性(RSD:
<1.0%
定量测量重现性(RSD:
<1.0%
9.2.1.3测试记录
标准品名称(浓度“批号:
标准品COA付件号:
保留时间:
RT1
RT2
RT3
RT4
RT5
RT6
RT
相对标准偏
峰面积:
A1
A2
A3
A4
A5
A6
~A
相对标准偏
9.2.2线性
9.2.2.1方法:
选用一根C8或C18柱,4.6mmx250mm,5m流动相:
甲醇:
水=75:
25;
流速:
1.0ml/min;进样量:
5ul;检测波长:
254nm。
开启检测器电源,将工作波长设置为254nm预热,开启泵的电源开关,流量设置为1.0ml/min(75%甲醇做流动相),等待色谱柱充分平衡且检测器基线稳定,噪声和基线应符合规定的要求,进咖啡因标准品溶液200ug/ml,100ug/ml,25ug/ml,5ug/ml,1ug/ml10ul,每个样进样1次。
9.2.2.2可接受标准
相关系数R2>0.999
9.2.2.3测试记录
标准品名称(浓度”批号:
标准品COA附件号:
浓度(ug/ml)
峰面积(mAu*S)
附件号
1
5
25
100
200
标准曲线:
相关系数R2:
附件号:
9.3说明此确认过程中是否依草案计划进行。
如有偏差或变更应根据“偏差管理规程”对此给予说明并对是否通过或需补充的内容加以说明。
10验证周期
10.1目的:
旨在证实该设备的验证状态没有发生漂移。
10.2根据药监部门或法规要求进行强制性再验证。
10.3药品生产过程中,由于各种主、客观的原因,需要对该设备作某种变更。
在这种情况下,变更可能对产品质量造成重要的影响,因此,需要进行再验证。
10.4正常生产阶段,规定每年进行一次定期再验证。
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