动物实验基本操作.docx

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动物实验基本操作

动物实验基本操作一（固定、性别判断、表记）

【实验目的】在做动物试验时，为保证给药、实验顺利进行，防备被动物咬伤、正确鉴别动物性别、正确表记动物，要学会用正确方法捉拿实验动物、掌握鉴别动物性其余方法以及掌握表记动物的方法。

【实验对象】SD大鼠，KM小鼠，雌雄参半，体重180-250g。

【实验器材和药品】

器材：

鼠笼、大小鼠固定器、方木板、美式图钉、细绳、防备手套

药品：

苦味酸80%~90%酒精饱和溶液、20%乌拉坦

【实验步骤】

一、小鼠的捉拿

1、徒手固定：

用右手提起尾巴中部，放在鼠笼罩或其余粗拙面上。

向后上方轻拉，

此时，小鼠前肢牢牢抓住粗拙表面。

左手拇指和食指快速捏住小鼠颈背部皮肤，再置小鼠于左手心，并以左手掌心和中指夹住小鼠背部皮肤，无名指压住小鼠尾根部，将其固定于手中。

右手可行注射或其余操作。

2、固定器固定：

尾静脉注射或给药时，将小鼠放进固定器中或许大小和重量合适的

容器（如烧杯），只露出尾巴，该类容器能够压住尾部，防止其活动。

勿固定过紧造

成窒息死亡。

进行腹腔手术或心脏采血时，先准备一个15-20cm的方木板，边沿钉入五颗钉子。

将小鼠四肢分别用20-30cm的线绳捆绑，线的另一头分别绑在方木板的钉子上，而且在头部上颚切齿牵引一根线绳，也固定在钉子上，达到完整固定。

二、大鼠的捉拿

4-5周内的大鼠，方法同小鼠。

周龄较大的，则：

1、第一戴好防备手套。

2、

用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴中部将大鼠提起，放在大鼠饲养盒的面罩上。

3、左手趁势按、卡在大鼠躯干背部，略加压力向头颈部滑行。

4、以左手拇指和食指捏住大鼠两耳后部的头颈皮肤，其余三指和手掌握住大鼠背部皮肤，达成抓取保定。

三、性别判断

小鼠、大鼠性别判断

（1）幼鼠外生殖器与肛门间隔短的是♀，外生殖器与肛门间隔长的是♂。

（2）成年动物可直接肉眼辨识，雄性有膨起的阴囊和阴茎，雌性动物有阴道口。

四、动物的标志

小鼠的短期标志法：

苦味酸80%~90%酒精饱和溶液（黄色），标出属于自己的编号【注意事项】

1、实验人员要有精神准备：

掌握方法，缜密细致，做好防备。

2、动物喜悦的时候不要抓取，待其寂静下来。

3、依据受试动物的给药部位或采血方法的不一样，预先选择徒手固定仍是固定器固定。

4、固准时掌握好力度，过分用力会使小鼠颈椎脱臼或窒息死亡，若用力过轻头部能

反转过来咬伤实验者的手。

【思虑题】

1.在固定实验动物时怎样才能快、准、稳？

动物实验基本操作二（给药门路、采血）

【实验目的】在做动物试验时，为保证给药、采血实验顺利进行，要掌握依据不一样的状况进行动物给药以及采血的正确方法。

【实验对象】SD大鼠（180-250g），KM小鼠（18-22g），雌雄参半。

【实验器材和药品】

器材：

鼠笼、大小鼠固定器、方木板、长钉、细绳、防备手套,灌胃针，注射器（1ml,5ml）、棉球，剪毛剪、手术剪、手术刀、采血管、弯头镊子

药品：

生理盐水、75％酒精棉球，一次性采血管，一次性EP管

【实验步骤】

一、给药门路

1、大、小鼠的灌胃法

用左手固定鼠，右手持灌胃器（安好灌胃针并已吸好药物），将灌胃针从鼠的嘴角插进口腔，压迫鼠的头部，使口腔和食管成向来线，轻轻转动针头刺激鼠的吞咽，将灌胃针沿咽后壁慢慢插入食管，假如动物挣扎厉害，退出灌胃针，待动物寂静下来，从头插入。

灌胃针前端达到膈肌水平，即可慢慢推灌药液，如很畅达，则说明已进入胃内。

如不畅达，且动物挣扎厉害，须拔出从头操作。

2、皮下注射左手拇指和食指轻轻提起动物皮肤，右手持注射器，将注射针刺入

皮下，若针头简单摇动则证明针头已在皮下，推送药液，迟缓拔出注射针，略微用

手指压片晌针刺部位，以防药物外漏。

3、肌肉注射采纳肌肉发达，无大血管经过的部位，如臀部或股部。

（肌肉注射比

皮下和腹腔注射用得较少，但当给动物注射不溶于水而混悬于油或其余溶剂中的药

物时，常采纳肌肉注射）

4、腹腔注射A、左手抓取并固定好动物，将腹部向上。

B、右手持注射器将针头在

下腹部腹白线稍左或偏右的地点，从下腹部朝头方向几乎平行地刺入皮下，进针

3-5mm。

C、再使针头与皮肤呈45°角斜穿过腹肌，当针尖穿过腹肌进入腹腔时，有

落空感，而后固定针头，保持针尖不动，回抽，无回血，无肠液、尿液，即可慢慢

推入药液。

5、静脉注射（尾静脉注射）A、大、小鼠尾静脉共有3根（左、中、右），一般常选

用双侧的静脉。

注射前，先把动物固定在裸露尾部的鼠尾固定器内（可用烧杯、铁丝罩或粗试管等物取代）.B、拔去尾部静脉走向的毛，用75％酒精棉球频频擦抹鼠尾，以达到消毒、血管扩充及融化表皮角质的目的。

C、尽量从静脉的远心端刺入血管，回一下血，将药液迟缓注入。

D、注射完成，用棉球压住针眼，拔去针头，持续压迫数分钟。

二、采血

1、心脏采血将动物仰卧固定在鼠板上，剪去胸前区部位的被毛，消毒。

在左边

第3-4肋间，用左手食指摸到心搏处，右手持注射器选择心搏最强处穿刺。

当针穿刺入心脏时，血液因为心脏搏动的力量自动进入注射器。

如不需保存动物存活时，也可麻醉后切开动物胸膛，直接用注射器刺入心脏内采血，也可剪破心脏直接用注射器或吸管吸血。

2、摘眼球采血用左手抓住动物颈部皮肤，并将动物轻压在实验台上，略微侧卧，

左手拇指尽量将动物眼四周皮肤往眼后压，使动物眼球突出并充血，用弯头镊子迅

速摘除眼球，眼眶内很快流出血液。

3、眶静脉丛（窦）采血将动物麻醉，采纳侧眼向上固定体位，用左手拇指和食

指从背部较紧地握住大（小）鼠颈部。

取血时，左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部双侧，是头部静脉血液回流困难，眼球充足外突，眶静脉丛充血。

【注意事项】

1、掌握方法，缜密细致，做好防备。

2、常用灌胃量：

小鼠：

0.2～1ml,大鼠1～4ml

3、摘取眼球采血法一般可取约为小鼠体重4-5%的血液量。

【思虑题】

1.怎样娴熟掌握大小鼠的给药门路和采血方法？

动物实验基本操作三（安乐死）

【实验目的】在科学应用和教课实验中，因实验终结、研究所需供给血液或其余组织脏器、不合适生殖或许是当动物的痛苦与窘况程度超出预期等状况下，需

要我们以人道的方式使动物死亡，使动物在最低程度的痛苦、惧怕，并在最短的时间内失掉知觉和痛觉。

【实验对象】KM小鼠，雌雄参半，体重18-22g。

【实验器材和药品】

器材：

鼠笼、大小鼠固定器、注射器（1ml）、棉球，剪毛剪、手术剪、手术刀、采血管、弯头镊子、烧杯100ml、方木板

药品：

吸入性麻醉剂、注射型麻醉剂、75％酒精棉球

【实验步骤】

1、颈椎脱臼法用拇指和食指用力往下按住鼠头，另一只手抓住鼠尾（鼠尾根部），

用力今后上方一拉，使颈椎脱臼，造成脊髓与脑髓断离，动物立刻死亡。

2、放血法麻醉动物后，将动物股、颈动脉、静脉全切断，血液立刻喷出；用一

块湿纱布不停擦去股动脉切四周处的血液和血凝块，同时不停的用自来水冲刷流血，使股动脉切口处保持畅达，动物3～5分钟内即可致死。

3、药物致死法

A、药物吸入药物吸入是将有毒气体或挥发性麻醉剂，被动物经呼吸道吸入体内而

致死，将KM小鼠放入含有乙醚的密封烧杯中，3-5分钟后可死亡

B、药物注射将药物（腹腔注射硫酸镁）经过注射的方式注入动物体内，使动物死

亡

【注意事项】

1、实验人员要有精神准备：

掌握方法，缜密细致，做好防备、战胜心理紧张等要素

【思虑题】

1.安乐死的意义是什么？

实验二家兔的气管及动脉插管

实验目的

1.学习捉拿家兔的正确方法和固定。

2.掌握常用手术器材的正确使用方法。

3.学习动物实验的基本操作技术，包含麻醉、切口与止血、气管插管术、颈动脉插管术

实验对象健康家兔,雌雄均可,体重2.0～

实验内容

1.家兔的捉拿、麻醉与固定

2.颈总动脉、神经等的分别技术

3.气管插管

4.动脉插管

器材与药品器材：

兔手术台、哺乳类动物手术器材一套、三通、动脉夹、动脉插管、气管插管、纱布、棉线、注射器、绑腿带、污物杯。

20%氨基甲酸乙酯溶液（乌拉坦，4-5ml/kg体重，麻醉用）

步骤和方法

一、家兔的捉拿与称重

1、家兔的捉拿：

右手抓住家兔颈背部皮肤，轻轻将家兔提起，快速以左手托

住其臀部，使家兔体重主要落左掌心上，免得损害动物颈部。

注意点：

家兔一般不咬人，但脚爪锋利，在挣扎易抓伤捕获者，因此捕获时要特

别注意其四肢。

2、家兔的称重：

将家兔放在婴儿秤上，待家兔寂静的时候察看体重并记录。

注意点：

（1）调零

（2）切勿用力按压称面

二、家兔的麻醉

1、麻醉药的注射

如图1：

助手的一侧上肢曲折与同侧的躯干夹住家兔的后半部位，同时该侧的手托住家

兔的腹部，另一只向上抓住家兔的颈背部，充足裸露耳背外缘耳缘静脉。

实验

者的左食指、中指轻夹耳根部使静脉充盈，从远心端以30℃角度进针刺入静脉

后顺血管平行方向深入1cm，左手拇指、食指在刺入部位将针头与兔耳固定，

即可注入麻醉药。

2、麻醉成效判断：

能够经过察看动物呼吸安稳深慢、角膜反射愚钝或消逝、肢体肌肉废弛、皮肤夹捏反射消逝四方面来判断能否达到理想的麻醉成效

三、家兔的气管与动脉插管

1、仰卧固定：

头部用一根粗棉线拉住兔的两只门齿后栓在兔板的铁柱或固定

于钩上。

两前肢平直放在胸腰部双侧,用粗棉绳的一端缚扎腕关节以上部位,

缚绳从背后左右交错穿过,压在对侧前肢的前臂上,再紧扎于兔板双侧的木钩

上,两后肢左右分开,缚绳扎踝关节以上部位,另一端分别固定于兔板后双侧

的木钩上，以下列图2。

2、气管插管操作重点

1）用手术刀时，先用手或器材使双侧组织牵拉紧张状况下，以刀刃作垂直的轻盈的切开，不要作刮削的动作。

2）气管插管术操作重点（）：

①颈部正中切开皮肤，钝性分别裸露气管、穿线备用。

②于气管中段第三或第四软骨环上向头端作一纵向倒“T”形切口。

③将气管导管由切口向胸部方向插入气管腔内。

④在气管软骨环之间进行结扎，并将棉线固定于插管分叉处。

3、动脉插管操作重点

①于气管一侧当心分别颈总动脉约3cm穿两线备用。

②远心端结扎、近心端用动脉夹夹紧。

③用眼科剪与血管呈45℃的角度从远心端开始在向心一侧剪开管壁的

1/3。

④插管前导管和压力换能器的肝素化。

⑤插管后结扎固定。

注意事项

1、麻醉动物时,注射速度先快后慢,边注射边察看动物麻醉指征。

如麻醉过浅,

动物挣扎时可适当追加麻醉药,切忌麻醉过深惹发迹兔死亡；

2、手术过程中操作应柔和,尽量防止不用要的损害和出血；

3、手术时,切开颈部皮肤后,尽量钝性分别,免得损害血管；

4、气管插管前，应注意止血，并将气管分泌物清理洁净；

5、动脉导管的插入端要圆滑，不可以过尖，以防刺破动脉壁，惹起大出血。

6、未扎紧动脉插管前不要松动动脉夹。

实验三、实验性肺水肿

【实验原理与目的】肺水肿是临床上常有的危重症之一，肺水肿是指过多的液体积

聚在肺间质或溢入肺泡腔内的病理状态。

当肺毛细血管流体静脉压增高、血浆胶体

浸透压降低，肺微细管壁通透性增高、肺淋巴回流阻碍等要素的某个或多个同时或

接踵作用，一般水肿液先在组织空隙中聚集，形成间质性肺水肿，而后发展为肺泡

性肺水肿。

肺水肿发生后，可惹起气体弥散阻碍以及肺泡通气与血流比率失调（如

果气道内存在水肿液，还会惹起通气阻碍），最后致使呼吸功能不全。

大剂量肾上腺

素可惹起机体血液从头散布，外周血管宽泛缩短，血液由体循环急速转移到肺循环，

使左心房压力和肺毛细血管有效滤过压增高，液体流入肺间质增加而出现肺水肿。

本实验的目的是用大剂量肾上腺素复制肺水肿模型，察看急性肺水肿的表现，剖析

发病机理。

【实验对象】SD大鼠，雌雄不限，体重180-250g。

【实验器材和药品】

器材：

弹簧磅秤，电子天平，手术器材1套，2ml,5ml注射器，听诊器1具，滤纸。

药品：

生理盐水，0.1%盐酸肾上腺素注射液，20%氨基甲酸乙酯溶液（乌拉坦，4-5ml/kg

体重，麻醉用）。

【实验步骤和察看指标】

1.取180-250g左右体重邻近的大鼠两只，做好标志（甲鼠、乙鼠），称重，察看动物的一般状况、呼吸和肤色。

2.甲鼠腹腔注射0.1%盐酸肾上腺素注射液1.5~2ml；乙鼠腹腔注射同体积生理盐水。

察看动物变化如活动状况、呼吸、肤色并做肺部听诊肺呼吸音，注意口鼻有无泡沫

液体流出。

如动物死亡，记录时间；若注射药物

20min后动物未死亡，可按

0.3%戊

巴比妥钠溶液1ml/100g腹腔注射，带麻醉成功后剪断动脉快速放血处死。

3.解剖尸体，止血钳夹住气管后拿出心肺，而后将心脏分别（注意不要损害肺组织），将表面血迹用滤纸擦去后正确称重，肉眼察看肺大概改变，剪开肺组织，注意察看

有无泡沫样液体流出。

4.计算大鼠肺系数。

肺系数计算公式：

肺系数=肺重量（g）/体重（kg）。

正常大鼠

肺系数为4~8。

【注意事项】

1.解剖动物时，注意不要损害肺表面和挤压肺组织，以防备水肿液流出，影响肺系数。

2.比较鼠处死方法只好采纳快速放血法，其余处死方法均可惹起肺水肿。

【思虑题】

1.实验鼠发生肺水肿的体制是什么？

2.实验鼠发生的呼吸变化发活力制是什么？

2020-2-8