天参益智胶囊中四味药材的薄层色谱辨别及淫羊藿苷的含量测定.docx
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天参益智胶囊中四味药材的薄层色谱辨别及淫羊藿苷的含量测定
天参益智胶囊中四味药材的薄层色谱辨别及淫羊藿苷的含量测定
朱洁,肖海涛,郝小燕罗俊,官志忠
【关键词】天参益智胶囊质量标准薄层辨别淫羊藿苷高效液相色谱法
Abstract:
ObjectiveToestablishthequalitystandardforTianshenyizhiCapsule.MethodsHerbaEpimedii,RadixAngelicaeSinensis,RhizomaAcoriTatarinowii,RadixPolygoniMultifloricumSuccoGlycinesSotaeinTianshenyizhiCapsulewereidentifiedbyTLC,andthecontentoficariinwasdeterminedbyHPLC.ResultsTheidentificationmethodwashighlyexclusive.Icariinshowedagoodlinearrelationshipintherangeof~μg,andr=98.Theaveragerecoverywas%,RSD=%(n=9).ConclusionThemethodisaccurateandsimplewithgoodreproducibility,anditcancontrolthequalityofthispreparationeffectively.
Keywords:
TianshenyizhiCapsule;QualityStandard;TLC;Icariin;HPLC
天参益智胶囊是在大量传统体会验方的基础上,研发的一种医治老年性痴呆疾病的中药制剂。
通过初步药效学研究说明[1,2],该复方对痴呆大鼠学习经历能力有明显的改善作用,对胆碱能功能消退有较好的爱惜和医治作用,可显著降低老年痴呆大鼠海马和皮质中兴奋性谷氨酸含量,拮抗谷氨酸介导的神经毒性作用,延缓衰老和防治老年痴呆。
为研究该产品的质量标准,咱们对制剂中的淫羊藿、当归、石菖蒲、何首乌4味药材的薄层辨别方式进行了研究,并以其中的淫羊藿苷作为指标性成份进行了含量测定。
1仪器与试药
仪器
HP1100高效液相色谱仪(包括HP1100泵,HP1100紫外检测器,HP1100柱温箱,HP1100/WND-3D工作站),QY-20三用紫外分析仪(上海市闻天仪器设备),KQ-250B型超声波提取器(昆山市超声仪器)。
试剂与药品
D-101型大孔吸附树脂(天津农药股分树脂分公司),硅胶(青岛美晶化工),氧化铝(200~300目,上海新诚精细化工),淫羊藿苷对照品、当归对照药材、石菖蒲对照药材、何首乌对照药材(由中国药品生物制品检定所提供,批号别离为,,,)。
乙腈为色谱纯,水为超纯水和蒸馏水,其余试剂均为分析纯。
天参益智胶囊(自制g/粒,批号:
1,2,3)。
2方式与结果
薄层辨别
淫羊藿的辨别
取胶囊内容物3g,加95%乙醇30ml,超声30min,滤过,滤液水浴挥干,残渣加1ml乙醇溶解,作为供试品溶液。
取缺淫羊藿阴性样品3g和淫羊藿药材1g,同法制备缺淫羊藿阴性样品溶液和淫羊藿药材对照溶液。
取淫羊藿苷对照品用甲醇制成1mg·ml-1的对照品溶液。
别离吸取供试品溶液和缺淫羊藿阴性样品溶液各10μl,淫羊藿药材对照溶液和淫羊藿苷对照品溶液各5μl,别离点于同一硅胶H板上,以氯仿-甲醇-甲酸(15∶1∶)为展开剂,展开2次,掏出晾干。
喷以5%三氯化铁乙醇液,晾干。
供试品色谱中,在与对照药材和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性样品无干扰。
结果见图1。
当归的辨别
取胶囊内容物3g,置于100ml的烧杯中,加入水60ml煎煮1h,滤过,滤液水浴挥至适量,用石油醚萃取3次,20ml/次,归并萃取液,水浴挥干,残渣加入醋酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液。
另取当归药材1g,同法制成药材对照溶液。
取缺当归阴性样品3g一样品法制备缺当归阴性样品溶液。
参照薄层色谱法[3]实验,吸取供试液和阴性样品溶液各10μl,当归药材对照溶液5μl,别离点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶板GF254上,用正己烷-醋酸乙酯(10∶1)为展开剂,展开,掏出晾干,置紫外光灯(365nm)下检视,样品与药材色谱相应的位置处显相同荧光的斑点,阴性样品无干扰。
结果见图2。
石菖蒲的辨别
取胶囊内容物3g,置于100ml的烧杯中,加入水60ml煎煮1h,滤过,滤液水浴挥至适量,用石油醚萃取3次,20ml/次,归并萃取液,水浴挥干,残渣加入醋酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液。
另取石菖蒲对照药材g,同法制成药材对照溶液。
取缺石菖蒲阴性样品3g,一样品法制备缺石菖蒲阴性样品溶液。
参照薄层色谱法[3]实验,吸取供试液和阴性样品溶液各10μl,石菖蒲药材对照溶液5μl,别离点于同一含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上,用石油醚-醋酸乙酯(8∶1)为展开剂,展开,掏出晾干,喷以10%的磷钼酸乙醇溶液,于105℃烘烤至斑点清楚。
样品与药材色谱相应的位置处显相同颜色的斑点,阴性样品无干扰。
结果见图3。
何首乌的辨别
取胶囊内容物3g,置于100ml烧杯中,加入蒸馏水50ml煎煮30min,滤过,滤液浓缩至适量,用氯仿萃取3次,30ml/次,归并萃取液,水浴挥干,残渣加入甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
另取何首乌对照药材g,同法制成药材对照溶液。
取缺何首乌阴性样品3g一样品法制备缺何首乌阴性样品溶液。
参照薄层色谱法[3]实验,吸取供试液和阴性样品液各10μl,药材对照溶液3μl,别离点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的高效硅胶G板上,以氯仿-丙酮(7:
1)为展开剂,饱和15min,展开约cm左右,掏出晾干,再以环己烷-醋酸乙酯(10:
为展开剂,饱和15min,展开,掏出晾干,置氨蒸气中熏至斑点清楚。
样品与药材色谱相应的位置处显相同颜色的斑点,阴性样品无干扰。
结果见图4。
淫羊藿苷的含量测定
色谱条件[3]
色谱柱为DiamonsilTMC18(5μm,250mm×mm);流动相为乙腈-水(30∶70);流速1ml·min-1;进样量10μl;波长270nm;柱温40℃。
供试品溶液的制备
取天参益智胶囊内容物g,周密称定,置具塞锥形瓶中,加稀乙醇25ml,周密称定,超声1h,用稀乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液即得。
对照品溶液的制备
周密称取淫羊藿苷对照品mg,置50ml容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,为对照品贮备液,浓度为402μg·ml-1。
阴性对照溶液的制备
取缺淫羊藿阴性样品粉末约g,周密称定,按上述供试品溶液的制备方式,制备阴性对照溶液。
系统适用性实验
别离吸取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液,按前述色谱条件测定。
结果说明,在本实验条件下,淫羊藿苷与其他组分峰分离度大于,阴性对照无干扰,理论塔板数按淫羊藿苷峰计算不低于1500。
结果见图5。
线性关系考察
别离周密吸取对照品储蓄液2,4,6,8,10ml置于25ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,备用;按上述色谱条件测定各浓度溶液的峰面积,以进样量(μg)为横坐标(X),以峰面积为纵坐标(Y),绘制标准曲线,淫羊藿苷在~μg线性关系良好。
回归方程为Y=7,r=98。
周密度实验
周密吸取同一对照品溶液10μl,按前述色谱条件重复进样6次,测得淫羊藿苷峰面积积分值的RSD为%,说明测定仪器周密度良好。
重复性实验
取同一批样品,按“供试品溶液的制备”方式,平行制备供试品溶液6份,按前述色谱条件测定,测定淫羊藿苷含量,峰面积RSD为%,说明测定方式重复性良好。
稳固性实验
取同一批样品制成的供试品溶液10μl,别离在0,2,4,8,12,24h各进样1次,测得淫羊藿苷在24h内峰面积的RSD为%,说明供试品溶液在24h内稳固性良好。
回收率实验
取已知含量的样品约g,共9份,周密称定,别离加入不同量的淫羊藿苷对照品,按“方式制备,测得淫羊藿苷的平均回收率为%,RSD为%(n=9),说明测定方式准确靠得住。
结果见表1。
表1回收率实验结果(略)
样品含量测定
取3批样品,按“方式制备样品溶液,别离周密吸取所得供试品溶液10μl,注入液相色谱仪测定。
结果见表2。
表2样品测定结果(略)
3讨论
淫羊藿的薄层辨别中《中国药典》(2005年版Ⅰ部)采纳以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)为展开剂,三氯化铝作为显色剂,实验中显色成效欠佳,改用以氯仿-甲醇-甲酸(15∶1∶)为展开剂,以三氯化铁显色,分离成效好,斑点显色清楚。
《中国药典》(2005年版Ⅰ部)中采纳挥发油对石菖蒲进行定性辨别,而该制剂的制备工艺中石菖蒲为直接水煎煮,因此咱们对石菖蒲的定性辨别方式进行改良,其结果所成立的方式显色成效明显,成点性好。
在当归定性辨别中,按《中国药典》(2005年版Ⅰ部)用乙醚超声处置,斑点多、干扰大,改用石油醚超声后,以正己烷-醋酸乙酯(10∶1)为展开剂,成效较好。
何首乌的定性辨别中,按《中国药典》(2005年版Ⅰ部)中以苯-乙醇(2∶1)为展开剂,斑点不明显,且苯毒性大,故将展开剂改成氯仿-丙酮(7∶1),饱和15min,展开约cm左右,掏出晾干,再以环己烷-醋酸乙酯(10∶)为展开剂,饱和15min,二次展开,掏出晾干,置氨蒸气中熏至斑点清楚,成效较好。
淫羊藿为本品的君药,所含的黄酮具有较好的脑神经爱惜作用[4],淫羊藿苷为淫羊藿中要紧成份,故将淫羊藿苷作为指标性成份进行了含量测定,所成立的测定方式具有准确、简便、快速、重复性好等特点,有利于本品的质量操纵。
【参考文献】
[1]罗喜荣,李红艳,郝小燕,等.天参益智方对老年性痴呆模型大鼠中枢神经递质的阻碍[J].中药药理与临床,2007,23
(1):
65.
[2]罗喜荣,李红艳,郝小燕,等.天参益智方对老年痴呆模型学习经历能力及Ab1-40的阻碍[J].时珍国医国药,2007,18(5):
1049.
[3]国家药典委员会,中国药典,Ⅰ部[S].北京:
化学工业出版社,2005:
229,附录VIB.
[4]芮菁.中药医治老年痴呆的研究状况[J].天津药物,2003,15
(1):
57.
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