乳腺癌HERFISH检测判读及报告.docx
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乳腺癌HERFISH检测判读及报告
乳腺癌HER2FISH佥测-检测意义、建议及标本准备
HER2与孚L腺癌
乳腺癌是女性恶性肿瘤中发病率最高的一种,正以每年3%〜4%的速度急剧上升,已
成为女性的第一杀手.临床上大约20-35%的浸润性乳腺癌存在HER2基因的扩增及蛋白的高表达.HER2基因〔又名HER2/neu,c-erbB-2〕位于17q12,是表皮生长因子受体〔HER〕家族成员之一,HER家族在细胞生理过程中发挥重要的调节作用.HER2编码相对分子量
185KD的跨膜受体样蛋白,具有酪氨酸激酶活性.HER2是重要的乳腺癌预后判断因子,
HER2阳性〔过表达或扩增〕的乳腺癌,其临床特点和生物学行为有特殊表现,治疗模式也与其他类型的乳腺癌有很大的区别.
HER2检测方法有免疫组化〔IHC〕和荧光原位杂交〔FISH〕等.?
2021年NCCN乳腺癌临床实践指南?
和?
乳腺癌HER2检测指南2021版?
均强调:
FISH是检测HER2基因状态的金标准.
一.检测意义
1.判断预后:
HER2阳性的乳腺癌浸润性强,无病生存期短,预后差.
2.指导治疗:
HER2基因扩增的乳腺癌患者对内分泌治疗药物〔如他莫昔芬〕产生耐药.
HER2基因扩增的乳腺癌患者对CMF方案不敏感,宜采用大剂量慈环类药物和紫杉醇类药物方案;HER2基因扩增的乳腺癌患者明显受益于Herceptin〔赫赛汀,2001年FDA批准
上市〕等靶向药物治疗.
二.检测建议
IHC和FISH检测HER2的状态一致性很高,但也存在着差异,数据统计如下表1和表
2示,对于IHC2+样本必须要用FISH进一步确认结果;0、1+或3+,根据条件,可再
做FISH验证.
Figmre1PwreinandGeneAnnpldkertion
0『2+A
IHC瞿eehqL,v电I
表1:
(2004)HER2AmplificationRatiosby
FluorescenceInSituHybridizationand
CorrelationwithImmunohistochemistryina
Cohortof6556BreastCancerTissues.Clinical
BreastCancer
IHC-
FISH
阳性率
〔%〕
阴性
阳性
0
892
56
5.9
1+
514
211
29.1
2+
327
415
55.9
3+
74
660
89.9
表2:
2007年卫生部科教司牵头组织全国73家三级
以上医院历时2年完成“荧光原位杂交技术〔FISH〕
用于乳腺癌患者Her-2检测的临床研究〞课题,检测
标本达3368例
因此,?
2021年NCCN乳腺癌临床实践指南?
和?
乳腺癌HER2检测指南〔2021
版〕?
均建议先进行HER2蛋白的IHC检测,IHC2+样本进行ISH〔FISH、DISH或CISH〕
检测.
►HER2H
IMP虹
MuasmllexCMCwiMiISHiffunw:
tpKiwihorww
rtcuN
wthorISMwiwwifvclmtR
IHCX
*
twii呷ibyvaliidAtedl・I**"血OHnuy11
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&—>9*H四茎七qpfiuniw*Equhta£al
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MuaitwflaxwitwinduM^rcAt
ISH—EthIHC(IfHrwmobnwk^
p-pHERMEPI? -bAdvMgiH£R2tCf>y 1ISH的. flftOJXD .AjvvrwHER『号叼 HE1R2MingA itajmb«r川LDMgfMj&fcftM I3H[*|i .HERJccfiy VMwborsignakifcail ——伊ISHH HER2CEP17 .A#«i9«HERZcwrnu*nb«r Eqwv«al MOMHjO■qWWI “rwult *huntberti9iuMr»il M«tf*1tKXtwtwinMC{ifum«WHimKIwtwithiltimiiv*焙HdwwiownwITpratM,nrorctoran«wwlEhI8HxlHC倡rww■ptdwi* «2021年NCCN乳腺癌临床实践指南? 三.样本准备: 1.标本类型: 〔1〕手术切除标本;〔2〕粗针穿刺活检标本;〔3〕活检标本. 2.标本固定: 所有乳腺癌标本离体后都应尽快固定〔1h内固定〕.固定时应将标本每隔5〜 10mm切开,并可在组织间嵌入纱布或滤纸等物.固定液量与所浸泡组织的比例应足够. 固定时间以6—72h为宜. 3.固定液类型: 4%中性〔磷酸缓冲〕甲醛固定液. 4.组织切片: 〔1〕切片厚度3-5um;〔2〕应有HE染色切片作为对照. 四.临床上哪些患者需要进行HER2检测 1.所有乳腺原发性浸润癌都应进行HER2检测; 2.只要能获取肿瘤组织,对复发灶或转移灶也应该进行HER2检测; 3.如HER2检测结果为阴性,但疾病复发且生物学行为提示可能为HER2阳性肿瘤时,应重 复HER2检测; 4.如HER2检测结果与组织病理学特征不相符时,如组织学分级为I级的浸润性乳腺癌HER2 阳性,应重复HER2检测. 组织学1级的类型腺癌: ? 浸润性导管或小叶癌,ER和PR阳性 ? 小管癌〔至少90%为纯小管癌〕 ? 粘液癌〔至少90%为纯粘液癌〕 ? 筛状癌〔至少90%为纯筛状癌〕 ? 腺样囊性癌〔至少90%为纯腺样囊性癌〕且常为三阴性 孚L腺癌HER2FISH检测-判读 一.信号观察流程 1.首先在HE/IHC切片上确认肿瘤区域; 2.在10X物镜下,于FISH标本上找到与HE染色切片上相同的组织细胞结构; 3.在40X物镜下扫描整张切片,观察是否存在异质性,要求至少找到2个浸润癌区域,计 数至少20个浸润癌细胞.满意的标本应是75%以上癌细胞核中有杂交信号; 4.在100X物镜下观察癌细胞核的FISH结果进行信号计数,注意上下调整焦距,以免遗漏信号. 二.实验失败、不能判读的情况 1.因操作等原因,细胞核被损坏,边界不完整; 2.组织过度消化,细胞核边界不完整,DAPI染色浅; 3.组织消化缺乏,25%以上的细胞核无信号; 4.自发荧光很强或细胞核分辨差,10%细胞核外有信号. 三.计数要求 1.计数区域可结合苏木精伊红染色进行肿瘤细胞标识; 2.选择具较好核分界的区域,要求细胞核大小根本一致、边界完整,DAPI染色均匀、核无 重叠,绿色着丝粒信号清楚; 3.随机计数确定的肿瘤区域中20〜30个细胞核中的双色信号,不要主观选择信号多的核计 数; 4.不要计数仅显示一种颜色信号的细胞核; 5.防止计数分裂像的细胞核或被细胞核分裂及边界不完整核; 6.如果2个同样大小的橘红信号之间距离缺乏一个常规橘红信号大小,只计为一个信号; 7.假设红、绿两信号的比值>20或众多信号连接成簇时可不计数,视为基因扩增; 8.假设为临界值,那么需要再计数20个细胞核中的信号或由另外一个观察者重新计数,如仍为 临界值,那么应在FISH检测报告中注明,或换其它方法或其它蜡块重新检测; 9.假设HER2基因扩增在不同癌细胞中存在异质性时,应在另一癌区域再计算20〜30个癌细 胞核中的红、绿信号值,报告其最大值,并加以注释; 10.判读时可以将乳腺组织中的正常细胞〔如成纤维细胞、血管内皮细胞、淋巴细胞、正常乳 腺上皮细胞〕的HER2信号和CSP17信号作为内对照. 如•修局部里包伯号不在国♦区域内. 〕|^卜渊胞松内为两个投色一两个绿色 讣数为: 两个柢也佑号和何不绿色心号.个粮色信号扩敬. 不口改如吐枝后仆,W: "隹/肝〞枇细嘀嶂K域进行价并.有此假号在川收乂除网. 讣收内: 阴个超色信“利曲小绿色小出色的号他裂开, 计数为,个料色埼弓和曲外绿色依年.个瞅 计也为,明十种色门号和个微色喷号. H故〃;•.个糖色•匚卜•个蛙色啕% 色格号眩瞿什.根也格的也被裂开. -揖包扉针,CEP17 •-ffiftW,LSIHCn-^rieu 一些常见信号类型及计数方法 [摘自乳腺癌HER-2基因检测t剂盒〔FISH法〕说明书一AbbottMoleularInc.] 四.结果判读 在清楚的肿瘤区域,按以上计数要求在至少20个核内计数GSPHER2〔红色〕和CSP17 〔绿色〕信号,分别记录GSPHER2和CSP17的信号总数,再计算平均每个细胞HER2拷 贝数、平均每个细胞CSP17拷贝数以及GSPHER2和CSP17比值. A.假设HER2/CSP17<2.0,且平均HER2拷贝数/细胞<4.0,HER2阴性; B.假设HER2/CSP17<2.0,且平均HER2拷贝数/细胞<6.0,但>4.0寸,HER2结果不确 定; C.假设HER2/CSP17>2.0,明ER2/CSP17<2.0而HER2拷贝数/细胞>6.0HER2阳 性. ? 乳腺癌HER2检测指南2021版〉〉 ? 乳腺癌HER2检测指南2021版〉〉 注: a: 对于HER2/CSP17比值〕2.0,但平HER2拷贝数/细胞<4.0的病例是否应该视为FISH阳性目 前尚存争议,建议对这局部病例在报告中加以备注,提示目前的争议,建议临床医师参考免疫组织化学 检测结果并与患者进行必要的沟通; b: 见于均质、连续的浸润细胞,且占浸润癌的10%以上 五.HER2FISH判读标准的变化 ? 乳腺癌HER2检测指南2021版? 判读标准: A.假设HER2/CSP17<1.8,HER2阴性; B.假设HER2/CSP17>1.8,12.2,HER2结果不确定; CHER2/CSP172.2HER2. 新旧判读标准的比拟: ①2021版新标准的截断值为2.0,2021版老标准的截断值为1.8和2.2; ②2021版新标准不只是HER2/CSP17的比值,需结合HER2基因的拷贝数进行判读;2021 版那么仅根据HER2/CSP17的比值进行判读,不考虑HER2基因拷贝数. 新旧判读标准衔接中可能出现的问题: ①2021版新标准出现HER2检测结果不确定的情况会比2021版标准更少; ②2021版新标准判读阴阳性结合了HER2基因的拷贝数,有些2021版标准判读结果为阴 性的标本,如果HER2基因拷贝数? 62021版新标准那么判为阳性. [? 乳腺癌HER2检测指南2021版? 与? 乳腺癌HER2检测指南2021版? ] 乳腺癌HER2FISH检测-报告及结果解释 一.报告要求 ? 乳腺癌HER2检测指南2021版? 要求检测报告包括如下内容: 患者信息〔包括姓名、 性别、年龄、门诊/住院号〕、送检医师姓名、送检日期、标本信息〔包括病理号和蜡块号卜 标本部位和类型、探针信息、检测方法、是否使
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